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Concordancia entre los métodos de aislamiento de Paenibacillus
larvae larvae a partir de muestras de miel y abejas.
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M. BASUALDO1, E.
FIGINI, J1. TORRES, A1.
TABERA, C1. LIBONATI, E1.
BEDASCARRABURE1-2.
1Area de Producción Apícola. Facultad
de Cs. Veterinarias. UNCPBA2. EEA
INTA FAMAILLÁ |
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INTRODUCCIÓN
La Loque americana (LA) es una enfermedad
bacteriana de larvas de abejas (Apis mellifera)
producida por Paenibacillus larvae larvae. Según Goodwin
y col. (1993) hay tres posibles estados: 1.- que P.
larvae esté presente pero no cause la enfermedad
(contaminación), 2.- que haya al menos una larva afectada pero
la enfermedad no es aparente al observador (infecciones subclínicas),
3.- que P. larvae afecte las larvas y produzca
síntomas visibles (infección clínica).
El diagnóstico a campo está basado en la
detección de signos clínicos pero la ausencia de los mismos no indica
que una colmena esté libre de esporas. Por ello se recurre a métodos
microbiológicos para identificar colonias con infecciones subclínicas:
a partir de muestras de miel (Hanssen 1984, Hornitzky y Clark, 1991;
Hornitzky y Nicholls 1993; Nordstrom y Fries 1995; Alippi 1995) y de
abejas Hornitzky & Karlovskis (1989).
Aunque no se conoce cuál de los
métodos es más sensible (Hansen & Brodsgaard 1999). |
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OBJETIVOS
Establecer la concordancia de los métodos de
diagnóstico microbiológicos a partir de muestras de miel y abejas en
colmenas de Apis mellifera. |
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MATERIALES Y MÉTODOS
- 33 colmenas en producción durante diez
años, sin uso de antibióticos.
- Primera inspección sanitaria el 5/11/02:
dos colmenas con signos clínicos de LA (mas de 200 UFC por placa )
que fueron retiradas del apiario.
- Las restantes se estandarizaron, se
recambiaron las reinas por celdas reales, de alto comportamiento
higiénico (PROAPI)
- Muestreo de miel y revisión clínica en
primavera y otoño, período 2002-2004.
- En la primavera de 2003 y otoño de 2004 se
tomaron también, muestras de abejas nodrizas.
- Para la detección de esporos viables de
P. larvae en miel, se utilizó la técnica de Alippi (1995)
y en abejas, la técnica de Hornitzky y Karlovskis (1989).
- Se consideraron positivos, aquellos
aislamientos que presentaron al menos una UFC.
- Los resultados se expresaron como el
promedio de UFC desarrolladas en las tres placas.
- La concordancia entre ambos métodos (miel
y abejas) utilizados para el aislamiento fue contrastada mediante el
índice Kappa.
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Figura 1. Click para ampliar
Foto 1. Click para ampliar |
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RESULTADOS
- No se observó presencia de signos clínicos
de Loque Americana en ninguna colmena inspeccionada, durante todo el
período estudiado.
- Las dos colmenas que en la primavera de
2002, tuvieron alta carga de esporas en miel (30 UFC/placa)
presentaron valores promedio de 0.33 y de 0.66 UFC/placa en la
primavera de 2003
- En el otoño de 2004 el 26% de las colmenas
tuvieron aislamiento positivo, pero no presentaron signos clínicos (Figura
Nº1) y la cantidad de colonias de P. larvae que
crecieron en placa varió entre 0.33 y 5 UFC/placa, lo que indica que
la carga de esporas en las colmenas es muy baja.
- En el muestreo de primavera de 2003, 9
muestras negativas en miel, resultaron positivas en abejas (Tabla
1). Por lo que el 60% de las muestras negativas en miel serían
falsos negativos.
- En otoño de 2004, este porcentaje de
falsos negativos en miel se mantuvo en valores similares (59,1%).
- Se encontró un 20 % de falsos negativos en
muestras de abejas en primavera de 2003 y un 37,5% en otoño de 2004.
- No hay concordancia entre los métodos de
miel y abeja ni en primavera (Kappa=0.200, P>0.05) ni en otoño (Kappa=0.0244,
P>0.05).
- Solo una colmena tuvo resultados negativos
al aislamiento para la presencia de P. larvae larvae
en todos los períodos muestreados tanto en muestras de miel como de
abejas.
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Tabla 1. Cultivos
positivos y negativos a P. larvae larvae, en muestras de
miel y de abejas, en dos épocas del año. |
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MIEL |
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ABEJAS |
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Negativos |
Positivos |
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Primavera de 2003 |
Negativos |
6 (40%) |
9 (60%) |
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Positivos |
3 (20%) |
12 (80%) |
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Otoño de 2004 |
Negativos |
9 (40.9%) |
13 (59.1%) |
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Positivos |
3 (37.5%) |
5 (62.5%) |
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CONCLUSIONES
- El método de aislamiento a partir de miel,
tiene limitaciones para estimar la presencia de esporos viables de
P. larvae, al menos cuando la carga de esporos es baja
como ocurre en apiarios sin síntomas clínicos de la enfermedad, ya
que presenta un alto número de falsos negativos.
- El método de abejas sería más aconsejable,
ya que presentó una eficiencia del 22,5% superior.
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