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Colección de Mycobacterium avium subsp paratuberculosis
en Argentina
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Paolicchi, F.1;
Morsella, C.1; Cirone, K.1;
Moreira, A.1; Verna, A.1;
Romano, M.2;
Zumárraga, M.2; Giofreé, A.2;
Pavlik, I.3; Cataldi, A.2
1.Laboratorio de
Bacteriología, EEA INTA Balcarce, CC 276, (7620) Balcarce.
2.Instituto de Biotecnología, INTA
Castelar. Argentina.
3.Veterinary
Research Institute, Republica Checa.
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INTRODUCCIÓN
La Paratuberculosis (PTBC) es una enfermedad
emergente de los animales presente en muchos países donde se han
intensificado los sistemas de cría y también en regiones donde se han
controlado otras enfermedades como la Brucelosis o Tuberculosis. En el
ganado produce diarrea, pérdida de peso, debilitamiento y muerte. La
enfermedad ha sido relacionada a la Enfermedad de Crohn en los humanos
por el consumo de alimentos contaminados, en especial leche y
derivados. En Argentina la PTBC se ha diagnosticado en diversas
regiones y en sistemas de cría bovina para carne y para leche, y en
poblaciones de cérvidos en cautiverio. |
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Foto. Click para ampliar |
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OBJETIVO
Desde 1990 nos hemos abocado a la creación de un
cepario nacional mediante aislamiento, tipificación y almacenamiento
del agente etiológico de PTBC, Mycobacterium avium subsp.
paratuberculosis (Map), proveniente del cultivo de
muestras animales o de sus subproductos.
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Figura 1 y 2. Click para ampliar |
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MATERIALES Y METODOS
Las muestras han sido procesadas por métodos de
rutina, decontaminación con hexadecilpiridiniun y cultivadas sobre
medio Herrold con y sin micobactina, con agregado de antibióticos y
piruvato. Las cepas de Map han sido sometidas al
análisis por PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) para detección
del segmento de inserción IS900 característico de Map (Fig.
1). Además, un 80% de ellas han sido tipificadas por medio del
análisis por RFLP (búsqueda del Polimorfismo en el Largo de los
Fragmentos de Restricción, identificando 4 patrones distintos
denominados A, B, C, y E (Fig. 2). |
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RESULTADOS
Hasta la actualidad se han mantenido almacenadas
en nitrógeno liquido 178 cepas de Map provenientes de: a) bovinos
(n=150: 84,3 %), b) ciervos (n=26: 14,6%) y c) leche comercial
envasada (n=2) (Tabla 1).
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Tabla 1: Colección de cepas de Map,
por especie animal o alimento derivado y tipo de muestra orígen de los
aislamientos.
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ESPECIE |
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Tipo de muestra |
BOVINOS |
CIERVOS |
LECHE COMERCIAL |
TOTAL |
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Carne |
Leche |
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Materia Fecal |
n=99 |
n=31 |
n=8 |
- |
n=138 |
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Organos |
n=15 |
n=3 |
n=18 |
- |
n=36 |
|
Leche |
- |
n=2 |
- |
n=2 |
n=4 |
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Subtotal |
n=114 |
n=36 |
n=26 |
n=2 |
n=178 |
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TOTAL |
n=150 |
n=26 |
n=2 |
n=178 |
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Todas las cepas de Map almacenadas
resultaron positivas al análisis por PCR. Mediante RFLP se determinó
que en Argentina el patrón A es el predominante con un 75% de los
aislamientos de las cepas bovinas y con un 100% de las cepas de
Map aisladas de ciervos. Los patrones E y B corresponden al 13
% y 10% de los aislamientos respectivamente, mientras que el C es el
menos predominante.
Recientemente hemos aislado cepas de Map,
cuyo patrón genético es C provenientes de cultivos de leches
comerciales pasterurizadas. Esto pone de manifiesto probable riesgo de
trasmisión a humanos y la baja eficiencia que tendrían algunos
sistemas de pasteurización. |
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CONCLUSIONES
Estos estudios en cepas de Map han
sido útiles para conocer la heterogeneidad genotípica de las mismas y
la distribución regional para estudios epidemiológicos.
Han sido la base para estandarizar métodos como
ELISA utilizando los sueros de los animales con PTBC de donde
provienen las cepas aisladas.
El cepario permite contar con un banco de
germoplasma bacteriano para futuros ensayos de caracterización de
antígenos de Map, estudios de patogenicidad diferencial
y para el intercambio de cepas de referencia con laboratorios de otros
países. |
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Referencias
- Moreira A., Paolicchi F., Morsella C.,
Zumarraga M., Cataldi A., Bigi F.,Alito A., Overduin P., van
Soolingen D., Romano M. Distribution of IS900restriction length
polymorphism types among animal Mycobacterium avium
subsp. paratuberculosis isolates from Argentina and
Europe; J VetMicrobiol;1999; 70: 251-259.
- Paolicchi F.A., Zumarraga M.J., Gioffre
A., Zamorano P., Morsella C:,Verna A., Cataldi A., Alito A., Romano
M. Application of different methodsfor the diagnosis of
paratuberculosis in dairy cattle herds in Argentina; JVet Med; 2003;
50: 20-26.
- Pavlik I., Horvathova A., Dvoska L.,
Svastova P., du Maine R., Fixa B.,Rychlik I. Homogeneity/Heterogeneity
of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis
strains. Correlation between RFLP-Type and source (Animal,Enviromental,
Human); Proceedings of sixth International Colloquium of PTBC;1999;
321-329.
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XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología
X Congreso Argentino de Microbiología
17 al 21 de octubre de 2004 / C.C. Gral. San Martín, Buenos Aires,
Argentina |
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