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Resumen
El duraznillo negro (Cestrum parqui L´Hérit.) es una de las especies tóxicas de
mayor impacto económico en una amplia zona de producción ganadera d país. El
microanálisis del contenido digestivo ha permitido confirmar la ingestión de esta
especie en ovinos alimentados exclusivamente con heno de avena y raigrás anual, e
intoxicados experimentalmente. El objetivo de este trabajo fue evaluar la exactitud y la
precisión de la cuantificación de duraznillo negro por microanálisis del contenido
digestivo y de las heces de ovinos en pastoreo en pasturas polifíticas intoxicados en
forma forzada con esta especie. La exactitud se evaluó analizando si la cantidad de
duraznillo negro suministrada difería de la estimada en el tracto digestivo y en las
heces. La precisión se estimó por el cálculo de intervalos de confianza alrededor de la
media muestral. La cantidad de duraznillo negro evaluada (promedio de tres animales) no
difirió (p>0,05) de la suministrada siendo el porcentaje de recuperación de 97,03%+
12,06. Los intervalos de confianza alrededor de la media muestral fueron 81,3 a 112,9 %
(probabilidad 90 %) y 78,3 a 117,0 % (probabilidad 95%). Estos resultados indican que el
microanálisis del contenido digestivo de ovinos permite no sólo confirmar la ingestión
de duraznillo negro en base a la presencia de sus fragmentos en animales intoxicados en
pasturas en las que podrían haber ingerido varias especies de dicotiledóneas, sino
también estimar la cantidad de esta especie tóxica presente en el tracto con una
precisión de +15,8% alrededor de la media muestral (probabilidad 90%, n=3).
Palabras clave: Cestrum parqui, intoxicación, ovinos, plantas tóxicas,
microanálisis.
Summary
"Duraznillo negro" (Cestrum parqui
L´Hérit.) is one of the toxic species of highest economic impact in a wide area of
cattle production of Argentina. The microhistological analysis of the digestive content of
sheep fed with hay of oat and annual ryegrass, and intoxicated experimentally, allows to
confirm the ingestion of this species. The objective of this study was to evaluate the
accuracy and the precision of the quantification of "duraznillo negro" by
microanalysis of the digestive content and of the feces of sheep grazing in multiespecific
pastures and forced intoxicated with this species. The accuracy was evaluated analyzing
whether the quantity of "duraznillo negro" estimated in the digestive
tract and in the feces differred from the administered; the precision was determined by
the confidence intervals around the sample mean. The quantity of >duraznillo negro=
evaluated by microanalysis (average of three animals) did not differ (p>0.05) from the
given one, the percentage of recovery being of 97.03%+ 12.06. The confidence
intervals around the sample mean were 81.3 to 112.9% (probability 90%) and 78.3 to 117.0%
(probability 95%). These results indicate that the microhistological analysis of sheep
digestive content not only allows to confirm the ingestion of "duraznillo
negro" by the presence of its fragments in animals intoxicated in pastures or
grasslands in which they could have ingested several species of dicotyledons, but also to
estimate the quantity of this toxic species present in the tract with a precision of +15.8%
around the sample mean (probability 90%, n=3).
Key words: Cestrum parqui, intoxication, sheep, toxic species,
microhistological technique.
Introducción
El
duraznillo negro (Cestrum parqui L=Hérit.) es una especie de amplia difusión en
el país, la que se extiende desde el Río Colorado hacia el norte (Ragonese y Milano,
1984). Su toxicidad se conoce desde hace mucho tiempo y anualmente se registran numerosos
casos de intoxicaciones en el ganado doméstico que son mortales u ocasionan afecciones de
difícil recuperación en los animales sobrevivientes (López, Odriozola y Eyherabide,
1991). Esta especie tóxica es una de las de mayor impacto económico en una amplia zona
de producción ganadera en el país, la que incluye la Depresión del Salado. En esta zona
las muertes por intoxicación debidas a la ingestión de duraznillo negro ocurren con
frecuencia en animales en pastoreo sobre pastizales, en los que el número y abundancia de
dicotiledóneas es variable según la comunidad vegetal (León, 1975) y el manejo previo
(Sala, 1988). El diagnóstico de las intoxicaciones mortales ocasionadas por esta especie
se basa en observaciones de necropsia e histopatología hepática. En muchos casos al
realizarse la necropsia se ha iniciado la autólisis de los órganos, lo que impide o al
menos dificulta el diagnóstico de esta intoxicación (Odriozola, E., com.pers.). En un
trabajo anterior nosotros hemos demostrado experimentalmente que el microanálisis del
contenido digestivo permite confirmar la ingestión forzada de duraznillo negro, romerillo
(Baccharis coridifolia DC), y sunchillo (Wedelia glauca (Ort.)Hoff.)
en ovinos alimentados con heno de avena y raigrás anual (Yagueddú, Cid y López, 1998).
Sin embargo, no se conoce si es posible identificar fragmentos de estas especies tóxicas
en el contenido digestivo de animales en pastoreo en pasturas multiespecíficas,
situaciones en las que la presencia de otras dicotiledóneas haría más difícil el
reconocimiento de dichos fragmentos. Además, se desconocen la precisión y la exactitud
de las cuantificaciones realizadas por microanálisis, esto es, en qué medida difiere la
cantidad ingerida por el animal de la cantidad total de la especie tóxica estimada en el
tracto digestivo y en las heces producidas desde la intoxicación, y cuál es la
variación de esta cuantificación entre animales. El objetivo de este estudio fue
establecer la exactitud y precisión de la cuantificación de duraznillo negro por
microanálisis del contenido digestivo y de las heces producidas por ovinos intoxicados en
forma forzada con esta especie tóxica y que previamente pastoreaban en una pastura
polifítica.
Materiales y métodos
En
noviembre de 1996 tres ovejas Corriedale (peso promedio = 43,8+5 kg) se
mantuvieron durante 8 días en un potrero de 2 ha de la EEA Balcarce del I.N.T.A., en el
que estaban representadas dos comunidades vegetales. Treinta por ciento del potrero
correspondía a un sector de loma dominado por raigrás anual (Lolium multiflorum
L.) y Vulpia dertonensis (All.) Gola y el resto a un sector bajo dominado
por agropiro (Thinopyrum ponticum (Ppodp.) Barkw. & Dewey). La disponibilidad
fue estimada por doble muestreo (Carrillo y Fernández, 1988), y la composición botánica
de la vegetación por corte y separación manual de 10 marcos de 0,10 m2. Los
marcos fueron distribuidos en forma estratificada en las comunidades y al azar dentro de
cada una de ellas. Al noveno día las ovejas fueron ubicadas en corrales individuales e
intoxicadas por medio de sonda esofágica con la dosis letal de duraznillo negro (10 g MS
kg-1 PV) (López y otros, 1991).
El
material empleado en la intoxicación fue cosechado a fines de noviembre del mismo año en
un campo ubicado en la zona de Colinas Verdes, Partido de General Pueyrredón, pcia. de
Bs.As., en el que existían antecedentes de intoxicaciones con esta especie y consistió
en brotes y hojas maduras obtenidos de plantas que se encontraban en floración. Para
calcular la dosis a suministrar se determinó su contenido de materia seca (24 h, 60oC).
Para facilitar el suministro de la dosis letal correspondiente a cada ovino, el duraznillo
negro fue parcialmente deshidratado (30 minutos, 60oC) y reducido a un tamaño
de fragmento similar al observado en extrusas de fístulas esofágicas. Después de la
dosificación, los animales permanecieron en los corrales, con agua ad libitum.
Transcurridas 20 horas desde el suministro de la especie tóxica las ovejas presentaban
signos de intoxicación y fueron sacrificadas, efectuándose las necropsias. Finalmente se
recolectaron las heces de los corrales.
El
microanálisis del contenido digestivo permite estimar el porcentaje relativo de las
especies ingeridas tanto a partir de una muestra de aproximadamente 45 g MS compuesta por
15 submuestras obtenidas al azar de diferentes sectores del rumen-retículo, como de la
totalidad del contenido de las restantes regiones (Yagueddú y otros, 1998). La necesidad
de tomar una muestra compuesta en rumen-retículo obedece al tamaño del contenido de esta
región. Antes de preparar el contenido digestivo para su cuantificación (lo que implica
secado a estufa y molido sobre tamiz de malla 1mm), las muestras deben ser lavadas con
agua corriente para eliminar el mucus, restos de sangre y otras sustancias de origen
digestivo que pueden coagular al secarse en estufa impidiendo la dispersión y
reconocimiento de los fragmentos de las muestras. Por otra parte, para establecer la
exactitud y la precisión de la cuantificación de una especie es necesario expresar su
porcentaje como cantidad (g MS), y comparar esta cantidad con la cantidad suministrada o
ingerida. Esto planteaba un problema operativo ya que se debía secar el contenido total
del rumen-retículo para estimar su peso seco, pero a la vez lavar las muestras a analizar
por microanálisis antes de secarlas. Este problema fue resuelto de la siguiente manera:
1) Extracción del contenido de cada región del tracto y remoción del exceso de agua por
ligera presión sobre un tamiz de 35 mesh (0,5 mm); 2) Pesada de todo el material
escurrido; 3) Muestreo del contenido del rumen- retículo de los tres animales según lo
indicado anteriormente; 4) Lavado con agua corriente de las muestras de rumen-retículo,
de los contenidos totales de las otras regiones y de las heces, sobre tamiz de 50 mesh
(0,3 mm); 5) Secado en estufa con circulación forzada de aire (24 h, 60 ºC) y pesada de
todo este material; 6) Cálculo del contenido total de rumen-retículo.
Con
el material de cada porción del tracto digestivo y de las heces se realizaron cinco
preparados histológicos para la determinación de su composición botánica por
microanálisis (Sparks y Malechek, 1968). La cuantificación se efectuó en base a la
densidad de fragmentos de cada especie (número de fragmentos por campo de microscopio con
aumento 100 x) en 100 campos. También se registró el número de fragmentos no
reconocidos, esto es, aquéllos en los que no se podía determinar si pertenecían a una
dicotiledónea o a una gramínea.
En
la cuantificación del duraznillo negro se consideraron fragmentos epidérmicos que
presentaban los tricomas típicos de esta especie y otros en los que sólo se observaban
células epidérmicas propiamente dichas que presentaban estrías cuticulares
características. Los tricomas de duraznillo negro son de dos tipos: 1) no glandular
uniseriadoBramificado y 2) glandular con cabezuela bicelular. Los porcentajes de
duraznillo negro se corrigieron teniendo en cuenta el porcentaje de fragmentos no
reconocibles en esta especie, y el efecto de la digestión. Para determinar cómo la
digestión ruminal afecta el reconocimiento de los fragmentos de duraznillo negro, tres
muestras del material empleado en la dosificación fueron secadas en estufa (24 h, 60EC),
molidas sobre tamiz de malla 1mm y cada una de ellas fue dividida en dos submuestras. Una
de las submuestras fue digerida in vitro, utilizando el procedimiento de Tilley y
Terry (1963), pero reduciendo el tiempo de incubación con microbios de rumen de 48 a 24
horas, dado que éste es el lapso en el que la dosis letal produce la muerte de los
animales (López, Spinelli y Villar, 1978). Después de 24 horas se recobraron por
filtrado los residuos húmedos de digestión. Por microanálisis se estimó el porcentaje
de fragmentos identificables en las muestras digeridas y en las no digeridas, y los
resultados fueron comparados por prueba de t.
Para
cada animal se estimó la cantidad de duraznillo negro en cada región del tracto
digestivo y en heces como el producto de su peso seco y el porcentaje de la especie
tóxica estimada por microanálisis. Finalmente, la cantidad total de duraznillo negro en
el tracto digestivo y en las heces de cada animal se expresó como porcentaje de los
gramos suministrados.
La
exactitud de la cuantificación realizada por microanálisis se analizó por una prueba de
t, evaluando si los gramos de la especie tóxica estimados diferían de los
suministrados. La precisión de la estimación se evaluó por el cálculo de los
intervalos de confianza (a= 0,05 y 0,10) alrededor de la media muestral (g de la especie
tóxica estimados). Dichos intervalos representan los rangos dentro de los que se
encontrará el valor de duraznillo negro presente en el tracto digestivo de los animales
intoxicados con 95 y 90% de probabilidad, respectivamente y fueron expresados como
porcentajes alrededor de la media muestral (n=3).
Resultados
La
disponibilidad del potrero en el que pastorearon los animales antes de ser intoxicados fue
de 3335 kg MS ha-1. La biomasa estuvo representada por un 85 % de gramíneas.
Las tres gramíneas dominantes (Lolium multiflorum Lam., Vulpia dertonensis
(All.) Gola y Thinopyrum ponticum) contribuyeron con el 62% a la biomasa, en tanto
que otras siete gramíneas sumaron un 25%. Dos ciperáceas (Carex sp y Eleocharis
sp) aportaron un 4%, y ocho dicotiledóneas aproximadamente un 7%. Si bien el número de
especies de dicotiledóneas fue elevado, sólo una de ellas (Dichondra mycrocalyx (Hall.)
Fabris ) tuvo un aporte significativo a la biomasa disponible (5%) en tanto que el 2%
restante correspondió a otras siete especies (Figura 1).
DISPONIBILIDAD= 3300 kg MS ha-1
El
porcentaje de materia seca del duraznillo negro suministrado fue de 20+0,5%,
y su digestibilidad 69,4+0,8 %. El porcentaje de reconocimiento de los
fragmentos de esta especie fue alto, y no fue afectado (p>0,05) por la digestión (74,3+7,0
y 73,2+1,5 % antes y después de la digestión, respectivamente). Por lo
anterior, los porcentajes estimados fueron corregidos en función del porcentaje de
fragmentos reconocibles del material usado en la intoxicación, pero no fue necesario
corregir por el efecto de la digestión en el reconocimiento de sus fragmentos.
Todos
los animales compusieron dietas variadas, con porcentajes de duraznillo negro de
11 a 24% en las distintas regiones del tracto digestivo. Dos de ellas (duodeno e íleon)
estaban vacías o el material presente era tan escaso que no permitió su análisis. En
los tres animales la menor concentración de duraznillo negro se halló en ciego mientras
que la mayor se dio en librillo de un animal y en rumen-retículo de los dos restantes
(Figura 2, Cuadro 1). La cantidad en gramos de duraznillo negro recuperada en la
estimación (promedio entre los tres animales) expresados como porcentaje de lo
suministrado (97,06+12,06%) no difirió del 100% (p>0,05).
| CUADRO 1: Relación
entre la cantidad de duraznillo negro (Cestrum parqui L=Hérit.) suministrada (S)
a ovinos en forma forzada, y el contenido total de esta especie (Total) en su
tracto digestivo y en las heces producidas desde la intoxicación. Para cada ovino se
indica como recuperado (R) el porcentaje de lo suministrado que representa
la sumatoria de lo estimado en todas las regiones del tacto digestivo y en las heces
producidas desde la intoxicación. R+R=rumen+retículo, L=librillo, A=abomaso,
Y=yeyuno, Ci=ciego, Co=colon, Re=recto.
Table 1: Percentage recovery (R) of experimentally
administered Cestrum parqui L´Hérit for each of three sheep. It was calculated as
the percentage of the administered amount (S) represented by the sum of
the content of this toxic species in each section of the digestive tract plus in feces (TOTAL).
R+R= rumen + reticulum, L= omasum, A=
abomasum, Y= jejunum, Ci= cecum; Co=
colon; Re= rectum. |
| |
R+R |
L |
A |
Y |
Ci |
Co |
Re |
Heces |
Total |
S
(g) |
R
(%) |
| OVEJA 1 |
| CONTENIDO
NETO (gMS) |
375,0 |
2,9 |
10,7 |
5,0 |
14,5 |
5,0 |
6,0 |
90,0 |
|
|
|
| DURAZNILLO
(%) |
23,0 |
18,5 |
19,0 |
19,5 |
16,4 |
18,5 |
22,6 |
19,4 |
|
|
|
| DURAZNILLO
(gMS) |
86,4 |
0,5 |
2,0 |
1,0 |
2,4 |
0,9 |
1,4 |
17,5 |
112,1 |
96,5 |
116,1 |
| OVEJA 2 |
| CONTENIDO
NETO (gMS) |
442,5 |
5,5 |
0,5 |
5,5 |
14,0 |
23,0 |
9,0 |
21,0 |
|
|
|
| DURAZNILLO
(%) |
19,0 |
15,0 |
11,0 |
13,0 |
11,0 |
13,0 |
16,0 |
19,0 |
|
|
|
| DURAZNILLO
(gMS) |
83,2 |
0,8 |
0,1 |
0,7 |
1,6 |
3,0 |
1,5 |
4,1 |
95,0 |
111,5 |
85,1 |
| OVEJA 3 |
| CONTENIDO
NETO (gMS) |
447,0 |
1,8 |
1,5 |
3,5 |
17,3 |
14,0 |
4,0 |
143,0 |
|
|
|
| DURAZNILLO
(%) |
19,0 |
24,0 |
21,7 |
16,2 |
11,7 |
22,6 |
14,3 |
12,2 |
|
|
|
| DURAZNILLO
(gMS) |
84,8 |
0,4 |
0,3 |
0,6 |
2,0 |
3,2 |
0,6 |
17,5 |
109,3 |
121,6 |
89,9 |
Los
intervalos de confianza calculados alrededor de la media muestral fueron 81,3 a 112,9 %
(probabilidad 90 %) y 78,3 a 116,9 % (probabilidad 95 %). La cantidad de la especie
tóxica eliminada en heces dentro de las 20 horas de su ingestión fue variable,
representando entre el 4 y el 18% de la cantidad suministrada (Cuadro 1).
Discusión
La
técnica de microanálisis ha sido utilizada en raras ocasiones para cuantificar la
ingestión de especies tóxicas por ganado doméstico y herbívoros silvestres (Alipayou,
Holechek, Valdez, Saiwana, Rusco y Cárdenas, 1993). Más aún, sólo se encontró una
referencia en la que se informa sobre el empleo de esta técnica para confirmar la
ingestión de especies tóxicas en condiciones de pastoreo (Panter, Ralph, Smart y Duelke,
1987). Por otra parte, excepto el estudio realizado previamente por nosotros (Yagueddú y
otros, 1998) no pudimos detectar en la bibliografía referencias sobre la evaluación de
la concentración de especies tóxicas en el tracto digestivo de animales intoxicados
experimentalmente.
La
distinción entre fragmentos de gramíneas y de dicotiledóneas por microanálisis no
ofrece dificultades ya que la disposición y forma de las células epidérmicas de estos
dos grupos de especies es diferente (Metcalfe, 1960; Metcalfe y Chalk, 1979), pero la
distinción entre fragmentos de especies de dicotiledóneas ofrece mayores dificultades
(Metcalfe y Chalk, 1979; Yagueddú y Cid, 1992). Por esta razón, la presencia en la
vegetación de otras dicotiledóneas además del duraznillo negro podría llevar a errores
en la estimación de esta especie, al analizarse el contenido del tracto digestivo de
animales en pastoreo. Sin embargo los resultados de este ensayo indican que si se toman
ciertos recaudos en la cuantificación, esto es, si ésta se realiza en base a la densidad
de fragmentos y se corrige el porcentaje de la especie tóxica en relación a su
porcentaje de fragmentos reconocibles, las estimaciones del porcentaje de duraznillo negro
son exactas. Además, la precisión de esta cuantificación es alta, ya que con una
muestra pequeña (n=3) se estima el porcentaje real en el contenido del tracto con una
precisión de15,8% alrededor de la media con un 90% de confianza.
El
porcentaje de fragmentos de "duraznillo negro" reconocible antes de la
digestión fue alto (75%), y no fue afectado por la digestión. Esto difiere de lo
encontrado por nosotros anteriormente (Yagueddú y otros,1998) donde el porcentaje de
fragmentos reconocibles fue de 50% y 10% antes y después de la digestión
respectivamente. Estas diferencias se deben a que en esa oportunidad sólo se
cuantificaron los fragmentos de duraznillo negro que presentaban al menos un tricoma,
mientras que en el presente trabajo se consideraron además otras características
epidérmicas lo que aumentó considerablemente el porcentaje de reconocimiento.
Los
porcentajes de duraznillo negro cuantificados en heces fueron sólo ligeramente inferiores
a los encontrados en rumen-retículo, lo que indica que en los casos de muerte de animales
a campo en los que pudieran identificarse las heces como pertenecientes al animal muerto,
su microanálisis permitiría confirmar la ingestión de esta especie sin necesidad de
muestrear el contenido del tracto digestivo.
Nuestros
resultados muestran que el microanálisis del contenido digestivo de ovinos permite no
sólo confimar la ingestión de duraznillo negro en base a la presencia de sus fragmentos
en animales intoxicados en pasturas o pastizales en las que aquéllos podrían haber
ingerido varias especies de dicotiledóneas, sino también estimar la cantidad de esta
especie tóxica presente en el tracto con una precisión de +15,8% alrededor
de la media muestral (probabilidad 90%, n=3).
Agradecimientos
Los
autores agradecen al Méd. Vet. Ernesto Odriozola por sus útiles comentarios en las
etapas iniciales de desarrollo de este trabajo, al Méd. Vet. Jorge García por su
colaboración en las necropsias y a las asistentes, Sras. Marina Dosanto y María Salomón
por su colaboración técnica.
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* Trabajo publicado en:
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