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Evaluación y comparación de dos medios de hemocultivo para el aislamiento de Brucella spp.
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Fiorentino, M.A., Cipolla, A.L., Malena ,R.C., Paolicchi, F.A. Laboratorio de Bacteriología, Grupo de Sanidad Animal, Unidad Integrada Balcarce, EEA INTA - Facultad de Ciencias Agrarias UNMdP. Argentina. CC276, (7620) Balcarce.
XIVa. Reunión Anual de la AAVLD
(Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorios de Diagnóstico)
13 al 15 de noviembre de 2002, Villa Gral. Belgrano, Sierras de
Córdoba. |
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e-mail:fpaolicchi@balcarce.inta.gov.ar
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Click sobre la imagen para ampliar. |
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Introducción
Un diagnóstico certero de brucelosis debería
ser establecido mediante el aislamiento del organismo de la sangre,
fluídos o tejidos. Muchos trabajos han evaluado la detección de Brucella
spp. a partir de cultivos de sangre en el hombre (2,4). Sin
embargo, son escasos los datos sobre la utilización de hemocultivos
en animales.
Objetivo
Evaluar la eficiencia diagnóstica de dos medios de cultivo líquidos para la detección de distintas especies de
Brucella en sangre.
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Materiales y métodos
Cepas bacterianas: B.melitensis
bio1, B.suis bio1, B.abortus bio1 B.ovis y
B.abortus S19.
Muestras de sangre: se tomaron asepticamente 60 m.l de sangre de caprinos, porcinos, bovinos y ovinos sanos, serológicamente negativos a brucelosis.
Estandarización del inóculo bacteriano: una colonia de cada cepa de
Brucella se diluyó en 1 ml de PBS, se realizaron diluciones hasta 10-5UFC. La sangre de cada especie animal se mezcló con el inóculo se obtuvo una concentración menor o igual a
10-3UFC.
Medios de Cultivos evaluados: (i)Hemobrucella
(HB) (Laboratorio Britania) (ii)Caldo triptosa citratado al
2%(CTC): (no comercial). (Iii)Controles sin sangre: B.melitensis
y B.suis Todas las muestras se inocularon por duplicado.
Subcultivos en placa y conteos bacterianos: los días 1,
3, 8, 10, 20 y 30 postinoculación (pi). Ver Figuras.
Figura 1: Brucella
abortus
Figura 2: Brucella
melitensis
Figura 3: Brucella ovis
Figura 4: Brucella
abortus S19
Figura 5: Brucella suis
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Resultados
En los subcultivos del medio HB se recuperaron el 100% de las cepas y en los realizados a partir del CTC el 90%.
A las 24hs pi se aislaron B.melitensis bio1, B.suis
bio1, B.abortus bio1 y B.abortus S19 en ambos medios,
B. ovis fue aislada a las 72hs pi a partir de HB y no fue recuperada del CTC.
Los medios HB inoculados con sangre porcina infectada con
B. suis presentaron un
contaminante.
Las cepas de Brucella recuperadas de los
medios de cultivo conservaron las propiedades morfológicas y bioquímicas (1).
Conclusiones
- Los mejores resultados fueron obtenidos
utilizando el medio HB con todas las cepas exceptuando B.suis.
- La presencia de contaminantes podría
interferir con el éxito en el diagnóstico por hemocultivos y
por lo tanto a la presencia de falsos negativos.
- La intermitencia en la detección de B.abortus
S19 pudo deberse a la baja concentración bacteriana en al medio
HB no identificada por el método de conteo utilizado,
resaltando la importancia de realizar los subcultivos
semanalmente y evaluar los hemocultivos por 30 días, ya que un
tiempo inferior en la frecuencia de control podría contribuir
al diagnóstico errático.
- En el presente trabajo la sensibilidad
del medio HB fue mayor que la del CTC.
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Referencias
1-ALTON, G.G.; JONES, L.M.; ANGUS, R.D. and
J.M. VERGER. 1988. In: Techniques for the brucellosis laboratory.
INRA. Paris. p. 143-155. 2-LI, J.; PLORDE, J.J. and L.G. CARLSON.
1994. J.Clin.Microbiol. 32:2829-2831. 3-ROMERO, J.; BOUZA, E.; BOZA,
E.; PLANES, A. and A. RODRIGUEZ. 1993. Recomendaciones de la
Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología
Clínica. http://www.seimc.org/protocols/cap3.htm 4-YAGUPSKY,
P. 1999. J.Clin.Microbiol. 37:3437-3442.
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