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2000
RESUMEN
La
industria láctea Argentina experimentó un importante desarrollo, posibilitando proyectar
su producción al mercado internacional. Esto determinó una creciente competitividad en
materia de calidad de leche, la cual depende ampliamente de la sanidad de los rodeos. Este
trabajo tiene por finalidad determinar la prevalencia de la infección por el virus de la
Leucosis Bovina (BLV) en los partidos de General Pueyrredón y Balcarce, pertenecientes a
la Cuenca Lechera Mar y Sierras (CLMS), mediante la detección de anticuerpos específicos
por la técnica de ELISA. Se utilizaron en una primera instancia, pools de leche de
38 establecimientos para detectar anticuerpos reaccionantes contra el BLV. En los rodeos
que resultaron negativos al ELISA en pool de leche se realizó un muestreo
individual de la totalidad de los animales. En el caso de los establecimientos positivos
en pool de leche, se diseñó un muestreo individual representativo de algunos de
ellos. En el partido de Gral. Pueyrredón se procesaron 19 pools de leche,
resultando 17 (89.5 %) positivos y 2 (10.5 %) negativos. No se hallaron animales positivos
para anticuerpos contra el BLV en el muestreo individual, en el primer establecimiento
negativo en pool de leche (n: 43), pero se detectaron 3 animales positivos (1.59 %,
n: 188) en el segundo. En los 8 establecimientos positivos en pool de leche
muestreados individualmente, sobre un total de 1058 muestras, 402 resultaron positivas
(38.0%). En el partido de Balcarce sobre 19 pools de leche analizados, 16 (84.2 %)
resultaron positivos y 3 (15.8 %) negativos. Sólo fue muestreado individualmente uno de
los tambos negativos, no registrándose animales positivos (n:130). De los 5 tambos
positivos muestreados individualmente (n:551), 289 muestras (52.4 %) resultaron positivas.
Estos resultados indican un aumento de la prevalencia de infección por BLV en 17.6 % (X2=
3.92, p= 0.047) respecto a relevamientos previos. Esto demuestra la necesidad de
implementar urgentes medidas de control para reducir el grado de diseminación del BLV.
Palabras clave: virus de la Leucosis Bovina (BLV), prevalencia, ELISA.
SUMMARY
The dairy industry of Argentina has experienced an important development,
which has made possible to project its production to the international market. This fact
has generated special interest in the improvement of the milk quality, which depends
principally on the health of herds. The purpose of the present work is to determine the
prevalence of infection with Bovine Leukemia Virus (BLV) in the counties of General
Pueyrredón and Balcarce, both belonging to the Cuenca Lechera Mar y Sierras (CLMS). The
procedure employed to identify herds or individual cattle infected with BLV was the
detection of specific antibodies by an ELISA test. First, we analyzed samples of pooled
milk from 38 herds. An individual sampling of the totality of cattle from the herds with a
negative result on the pool-milk sample was done. In the case of herds that gave a
positive result on pooled milk, a representative individual sampling of some of them was
carried out. In the county of General Pueyrredón 19 pool-milk samples were processed: 17
of them (89.5%) resulted positive and 2 (10.5%) negative. No cattle positive for anti-BLV
antibodies was found in the individual sampling in one of the herds negative in the
pool-milk sample (n=43), but 3 positive cattle (1.59%, n=188) were found in the other. The
analysis of 1058 individual samples obtained from 8 herds that resulted positive in the
pool-milk sample showed that 402 (38%) were positive for anti-BLV antibodies. In the
county of Balcarce 19 pool-milk samples were analyzed: 16 of them (84.2%) were positive
and 3 (15.8%) negative. Individual samples from only one of the 3 negative herds were
processed, all resulted negative (n=130). Five hundred and fifty-one individual samples
from 5 positive herds were analyzed, 289 of them (52.4%) resulted positive in the ELISA.
These results indicate an increase in the prevalence of infection with BLV of 17.6% (X2=3.92,
p=0.047) comparing with a previous studies. These data
reflect the urgency in the implementation of control measures to reduce the
degree of dissemination of BLV.
Key words: Bovine Leukemia virus (BLV), prevalence, ELISA.
INTRODUCCION
La sanidad en los rodeos lecheros ha estado dirigida a combatir enfermedades como
la fiebre Aftosa, Brucelosis, Tuberculosis y Paratuberculosis, entre otras. En estos
últimos años la Leucosis Enzoótica Bovina (LEB) ha comenzado a tener mayor relevancia,
debido a la gran diseminación de su agente causal en los rodeos lecheros, y a las
exigencias impuestas por el comercio exterior en la venta de animales en pie, productos
lácteos, semen, embriones, etc. La LEB es una enfermedad vírica producida por un
retrovirus perteneciente a la familia Retroviridae. La LEB es una de las
neoplasias más comunes en bovinos de leche, presente en un importante número de países
(Theilen G. y Madewell B, 1987) . La enfermedad, que se presenta sólo en un bajo
porcentaje de los bovinos infectados por el BLV, se caracteriza por la proliferación de
linfocitos neoplásicos, que resulta en la formación de masas tumorales sólidas y
discretas y/o infiltración difusa de varios tejidos y órganos. Este proceso neoplásico
involucra casi invariablemente los linfonódulos; aunque el abomaso, corazón, útero y
otros órganos también se ven frecuentemente afectados (Ferrer J, 1980).
El
BLV también es considerado agente causal de la Linfocitosis Persistente (LP), un estado
de patología benigno, asintomático, que se caracteriza por la elevación en el número
absoluto de linfocitos B en sangre (Ferrer J, 1980). Si bien existen formas tempranas de
infección por BLV, alrededor del 20% de los animales, en general la misma ocurre cuando
los animales alcanzan la edad de servicio y luego de acceder a la sala de ordeñe.
Debido
a que virtualmente todo animal infectado con BLV desarrolla anticuerpos dirigidos contra
el virus (Gupta P y Ferrer JF, 1981), el diagnóstico se basa en la detección de los
mismos. Técnicas como inmunodifusión en gel de agar (AGID)(Miller JM y Van der Maaten
MJ, 1977), radioinmunoensayo (RIA) (McDonald HC y Ferrer JF, 1976) y test de ELISA (Nguyen
VK y Maes RF, 1993; Klintevall K, Naslund K, Svedlund G, Hajdu L, Linde N y Klingeborn B,
1991; Florent G, Delgoffe JC y Zygraich N, 1988) han probado tener una importante
sensibilidad y especifidad en la detección de anticuerpos contra el BLV (Gupta P et al,
1981) .
Pelzer
K y Sprecher D (1993) hallaron que los costos directos asociados a la presencia clínica
de la infección por el BLV incluyen pérdidas en la producción de leche, en el valor de
la carcaza y la pérdida de un potencial ternero si la vaca está preñada. En tanto que
las pérdidas indirectas debido a la infección por el BLV están asociadas con
limitaciones en las oportunidades de venta de semen o embriones e inclusive de animales
vivos. En cambio, estudios realizados por Brenner J, Vann-Haam M, Savir D y Trainin Z
(1989) revelan que la disminución en la producción que presentan las vacas infectadas
con el BLV no es altamente significativa, ocurriendo algo similar con los parámetros
reproductivos. Esto puede explicarse debido a que los animales infectados con el BLV son
eliminados tempranamente del rodeo, con lo cual su eficacia no puede ser evaluada
estadísticamente en forma completa.
Si
bien en la actualidad en la Argentina no se está aplicando un programa oficial de control
o erradicación del BLV, la finalidad de este trabajo es proveer un diagnóstico de
situación de la infección por BLV en dos de los partidos que conforman la CLMS. Esto
permitirá conocer la situación serológica en la región y contribuirá, en el futuro, a
la organización de un programa de control y erradicación del BLV.
MATERIALES Y METODOS
El
presente trabajo se realizó en tambos de los partidos de Gral. Pueyrredón y Balcarce,
ambos pertenecientes a la CLMS, ubicada en el sudeste de la provincia de Buenos Aires. Se
trabajó con muestras de suero y leche determinándose la presencia de anticuerpos
específicos contra el BLV mediante una técnica de ELISA de bloqueo (ELISA 108/97),
desarrollada por el Laboratorio de Virología de la Fc. de Cs. Veterinarias de la
Universidad del Centro de la Pcia. de Buenos Aires. La evaluación de esta técnica de
ELISA en términos de sensibilidad y especificidad ha sido descripta por Gutiérrez SE,
Dolcini G, Arroyo G, Rodriguez Dubra C, Ferrer J y Esteban EN. (en prensa).
El
muestreo se dividió en dos etapas, en primer lugar se realizó un muestreo directamente
del tanque de leche luego del ordeñe de todos los animales (pool de leche). Se
dispuso de un total de 19 pools de leche de tambos pertenecientes al partido de
General Pueyrredón y de 19 pools de leche en el partido de Balcarce. En estas
muestras se determinó si los establecimientos tenían animales con anticuerpos
reaccionantes contra el BLV. Este método se utilizó como tamiz para identificar los
rodeos infectados. En una segunda etapa, se realizó un muestreo individual de todos los
animales pertenecientes a los tambos que resultaron negativos al test de ELISA en
pool
de leche. Se obtuvieron 361 muestras individuales de leche correspondientes a 3
establecimientos. El análisis de estas muestras permitió establecer si los tambos
estaban libres de infección por BLV, o si tenían una prevalencia de infección inferior
al límite de detección del ELISA en pool de leche (límite de detección: 3% de
animales infectados en la mezcla). En el caso de los establecimientos positivos en
pool
de leche, se diseñó un muestreo individual representativo de algunos de ellos, para
establecer la prevalencia de infección por BLV en cada uno de los partidos analizados. De
esta manera obtenemos un diagnóstico de la situación epidemiológica del BLV, no sólo a
nivel de rodeos sino también a nivel individual. Para lograr dicho objetivo se utilizaron
las muestras de suero que son enviadas a la estación experimental del INTA Balcarce para
el diagnóstico de Brucelosis bovina, o en otros casos se obtuvieron muestras individuales
de leche de los animales directamente durante la rutina de ordeñe.
El
número de animales a muestrear se estableció a través de la siguiente fórmula estandar
para muestreo de poblaciones (n< 10.000), (Kish y Leslie, 1995):
n = 1.922 x (p x 1-p)
e2
p = prevalencia esperada
e = error esperado
Ajuste para poblaciones de menor tamaño:
n' = n'
1+ n
N
N = n de la población a muestrear
Se
tomaron muestras de 1058 animales pertenecientes a 8 tambos del partido de Gral.
Pueyrredón y 551 muestras de 5 tambos del partido de Balcarce.
RESULTADOS
De
la totalidad de pools de leche analizados en el partido de Gral. Pueyrredón, 17
(89.5 %) resultaron positivos, indicando la presencia de anticuerpos contra el BLV. Solo 2
pools (10.5 %) resultaron negativos a la prueba, indicando ausencia de animales
infectados en el rodeo, o bien un porcentaje de infección del rodeo inferior al 3 %.
En
las muestras correspondientes al partido de Balcarce 16 pools (84.2 %) resultaron
positivos al ELISA de bloqueo, mientras que los 3 restantes (15.8 %) resultaron negativos
a dicha prueba. Cuadro 1.
Cuadro 1: Cantidad de muestras, número (Nº) y
porcentaje (%) de rodeos positivos y negativos al ELISA en pool de leche en los partidos
de Gral. Pueyrredón y Balcarce.
Table 1: Quantity of samples, number (nº) and percentage (%) of positive and
negative herds by the ELISA in pool-milk, in the counties of Gral. Pueyrredón and
Balcarce.
| Partido |
Cantidad
de muestras |
Positivos (%) |
Negativos
(%) |
| Gral.
Pueyrredón |
19 |
17 (89.5 %) |
2 (10.5 %) |
| Balcarce |
19 |
16 (84.2 %) |
3 (15.8%) |
| Total |
38 |
33 (86.8 %) |
5 (13.2 %) |
En el cuadro 2 se
presentan los resultados correspondientes a las muestras individuales de los 2 tambos del
partido de Gral Pueyrredón con resultado negativo al pool de leche.
Cuadro 2: Serología individual por ELISA de
bloqueo en 2 establecimientos negativos al pool de leche en el partido de Gral.
Pueyrredón.
Table 2: Individual serology by blocking ELISA in 2 herds negative in
pool-milk from the county of Gral. Pueyrredón.
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Cantidad
de animales |
Resultado |
| Tambo
1 |
43 |
Todos los animales
negativos |
| Tambo
2 |
188 |
3 animales positivos
5 animales sospechosos |
En el partido de
Balcarce 3 tambos resultaron negativos a la prueba en pool de leche. Sólo uno de
los tambos fue muestreado individualmente (n: 130), resultando todos los animales
negativos para anticuerpos contra el BLV. Los 2 tambos restantes tenían un total de 20
animales cada uno. Debido a que el ELISA en pool de leche es capaz de detectar 3
animales infectados en una muestra de 100, se consideró que estos establecimientos
estaban libres de la infección por BLV. Se comenzaron
a evaluar luego los tambos que resultaron positivos al pool de leche. En el partido
de Gral Pueyrredón de las 1058 muestras evaluadas pertenecientes a 8 tambos, 402 animales
(38.0 %) resultaron positivos al test de ELISA de bloqueo. Por su parte en el partido de
Balcarce se testearon 551 muestras pertenecientes a 5 tambos, resultando positivos 289
animales (52.4 %). El resumen de estos resultados se presenta en la Figura
1.
DISCUSION
Las estimaciones
previas que se realizaron sobre la infección por BLV en la CLMS, indican que entre 1979 y
1981 la prevalencia de infección por BLV a nivel predial era de 4.35 % y que el 95.6 % de
los establecimientos permanecía libre de la infección (Esteban, E., datos no
publicados). En el período 1994-1995 el 68.5 % de los tambos presentaba animales
infectados, quedando solamente un 31.5 % de los establecimientos negativos al BLV (Ghezzi
P, Dolcini G, Gutiérrez S, Bani P, Torres J, Arroyo G y Esteban E, 1997). Si bien en este
estudio no están incluídos todos los partidos de la CLMS, se relevaron la casi totalidad
de los establecimientos lecheros de los partidos de Gral Pueyrredón y Balcarce,
estableciéndose una prevalencia de infección a nivel predial del 86.2 % y un 13.8 % de
establecimientos libres. De este modo se concluye que el número de establecimientos
infectados ha aumentado en un 17.6 % (X2= 3.92, p= 0.047),
Figura 2.
CONCLUSIONES
Los datos presentados demuestran
claramente que el número de animales infectados por el BLV ha aumentado rapidamente en
los últimos años, siendo la situación serológica muy similar en ambos partidos. Es de
destacar que en ninguno de los tambos analizados se toman medidas para el control de la
infección por BLV (esterilización de agujas, uso de guantes de tacto individuales,
etc.). Además, los tambos que se mantienen negativos al BLV se caracterizan por poseer un
bajo número de animales, o por ser totalmente cerrados
El incremento del 17.6% en la
prevalencia en un período de 3 años, hace necesario que tanto el productor como el
profesional veterinario, tomen conciencia de la necesidad de implementar medidas efectivas
de control, tendientes a evitar esta acelerada diseminación del BLV.
La identificación de los animales
infectados, la completa separación de animales positivos y negativos, inclusive aquellos
recién nacidos, la aplicación de correctas medidas de manejo y la reposición con
animales libres de infección han probado ser efectivas medidas de control (Theilen G et
al, 1987; Pelzer K et al, 1993).Estas medidas básicas deberán ser encuadradas en cada
zona en particular y en un proyecto global que tenga en claro los objetivos de control y
erradicación del BLV. De esta manera será posible disminuir la mortandad de animales por
linfosarcoma, y a medida que la infección por BLV sea impuesta como restricción
para-arancelaria a la exportación de animales y subproductos por un mayor número de
países, mantener una oferta importante de animales libres de BLV para el mercado
internacional.
BIBLIOGRAFIA
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* Trabajo publicado en:
Revista Argentina de Producción Animal Vol. 20 Nº 1: 77-83 (2000).
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