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1Laboratorio de Bacteriología, Departamento de Producción
Animal, EEA INTA. 2Facultad de Ciencias Agrarias, UNMdP. CC276,
(7620) Balcarce. 3CONICET. 4Asesoramiento Agropecuario
"El Prado", Esperanza, Santa Fe. 5Facultad de Veterinaria,
UNL, Santa Fe. ARGENTINA.
XIVa. Reunión Anual de la AAVLD (Asociación Argentina de Veterinarios de
Laboratorios de Diagnóstico) 13 al 15 de noviembre de 2002, Villa Gral.
Belgrano, Sierras de Córdoba.
Introducción
La
leche bovina destinada a la alimentación de terneros criados en guachera puede
contener patógenos que se trasmiten vía oral diseminando enfermedades graves.
La excreción de patógenos como Mycobacterium bovis y Mycobacterium
avium subsp paratuberculosis desde la glándula mamaria de vacas infectadas
es intermitente, pero resulta peligroso para la transmisión de Tuberculosis
(TBC) y Paratuberculosis (PTBC) a los terneros alimentados con leche no
destinada a consumo humano. Cortar la cadena de trasmisión a través de la
pasteurización (PT) de la leche sería deseable en los tambos en
saneamiento.
Objetivo
Evaluar
la eficacia de eliminación de la micobacteria patógena M. paratuberculosis
y saprófita Mycobacterium phlei de leche bovina inoculada
experimentalmente y sometida a tratamiento por PT.
Materiales y Métodos
Equipo: Pasteurizador de Leche para
Terneros de fabricación nacional, instalado en la localidad de El Trébol,
Provincia de Santa Fé. El régimen de PT fue de 300 litros de leche/hora, a
72,5 ºC de temperatura y realizando modificaciones estructurales en el equipo
para variar los tiempos de PT.
Tratamientos: Se realizó la PT a: 1) 72,5
ºC por 15", 2) 72,5 ºC por 30" o, 3) 72,5 ºC por 60". Entre
cada tratamiento el equipo fue sometido a lavado con solución desinfectante y
enjuagues para asegurar la limpieza del circuito.
Muestras y estudio bacteriológico: 50 Lts de leche del primer ordeñe
proveniente de un tambo de la zona libre de Tuberculosis, fueron mantenidos a
4ºC hasta su procesamiento. Se recolectaron en recipientes estériles 2
muestras de: A) leche cruda (200 ml) del tarro, y además desde la salida del
equipo despúes de cada tratamiento como se describe a continuación: B) Leche
cruda sometida a PT tradicional, C) Leche cruda inoculada con los siguientes
cultivos: *M. paratuberculosis (2,9x106UFC/ml), cepa aislada de leche de
bovinos con Paratuberculosis clínica, tipificada por dependencia a micobactina,
PCR y RFLP (Patrón genotípico "A") y *M. phlei (4x104
UFC/ml), D) Leche cruda inoculada y sometida a PT a 72,5 ºC por 15", E)
Leche cruda inoculada y sometida a la PT a 72,5 ºC por 30", F) Leche cruda
inoculada y sometida a la PT a 72,5 ºC por 60". Los recuentos bacterianos
del inóculo se realizaron en duplicado por el método de Miles y Misra por
microdilución cultivado sobre medio Herrold-Yema de huevo con micobactina (HYM)
en placas de Petri. La leche cruda, o inoculada y sometida a PT y luego de cada
tratamiento fue decontaminada con hexadecilpiridinium 0,75% y cultivada en HYM
para evidenciar la presencia de las *Micobacterias inoculadas. Los cultivos
fueron observados diariamente para identificación del desarrollo de M.phlei
y cada 15 días hasta los 4 meses para M.paratuberculosis (1).
Resultados
Las
muestras de leche cruda del tambo resultaron negativas a las micobacterias
estudiadas, mientras que de las muestras de leche inoculada no PT se recuperaron
M.paratuberculosis y M.phlei. En las muestras de leche sometida a
PT bajo cualquier tratamiento no fueron recuperadas micobacterias en HEYM. En la
Tabla 1 se registran los resultados del estudio bacteriológico.
Tabla 1: Recuento bacteriano de cada
inóculo utilizado y detección o no de Micobacterias según el tipo de
tratamiento (PT) dado a la leche.
| Tipo de Muestra |
Temperatura y tiempo
de pasteurización |
Mycobacterium
avium
subsp paratuberculosis |
Mycobacterium
phlei |
| Muestra A |
No PT |
Negativo |
Negativo |
| Muestra B |
72,5°C x 15" |
Negativo |
Negativo |
| Muestra
C |
No PT |
Positivo
(2,9x106UFC/ml) |
Positivo (4,0x104UFC/ml) |
| Muestra D |
72,5°C x 15" |
Negativo |
Negativo |
| Muestra E |
72,5°C x 30" |
Negativo |
Negativo |
| Muestra F |
72,5°C x 60" |
Negativo |
Negativo |
Referencias: Muestra A: Leche cruda;
Muestra B: Leche cruda pasteurizada a 72,5C°x15"; Muestra C: Leche cruda
inoculada no pasteurizada; Muestra D: Leche inoculada pasteurizada a
72,5C°x15"; Muestra E: Leche inoculada pasteurizada a 72,5C°x30";
Muestra F: Leche inoculada pasteurizada a 72,5C°x60".
Conclusiones
Los
resultados preliminares del estudio bajo estas condiciones, marcan una adecuada
eficiencia del Equipo Pasteurizador para eliminar micobacterias como las
estudiadas aquí desde la leche cruda infectada experimentalmente.
No se
observaron diferencias utilizando cualquiera de los tres tiempos de
pasteurización usados, por lo que realizando PT por 15" se reduce el
tiempo del proceso respecto a los otros con igual efectividad.
La leche cruda
utilizada carecía de micobacterias como las estudiadas y contenía al inicio
del estudio microorganismos comúnmente encontrados en leche de tambo, pero
estos también fueron eliminados por PT.
La mayor frecuencia de aislamientos
bacterianos en leche provenientes de tambos en Argentina le corresponde a los
géneros Staphilococcus spp, Streptococcus spp, Escherichia coli,
entre otros, pero informes de frecuencia de aislamientos de M.paratuberculosis
no fueron registrados en la bibliografía.
Resulta importante el control de
estos microorganismos en leche destinada a la alimentacion en guacheras, pues de
lo contrario pueden ser trasmitidos a los terneros durante su etapa de crianza
en estaca.
Micobacterias tales como M.paratuberculosis que se excretan
por leche intermitentemente, responsables de producir y mantener
Paratuberculosis en bovinos, deberían ser eliminados antes que los terneros
sean alimentados con la leche infectada.
Si bien en este estudio preliminar no
se probó la eliminación de otras micobacterias restaría comprobar la
susceptibilidad de las mismas a la PT con temperaturas similares a las que
fueron sometidas las muestras de leche.
Si al menos tal susceptibilidad fuese
similar a la que demostró M. paratuberculosis en el estudio, podría
asumirse que la PT de la leche bovina bajo estas condiciones destinada al
consumo por terneros podría minimizar y contribuir a bajar los riesgos de
trasmisión de enfermedades crónicas por vía oral.
Para evidenciarlo, otras
pruebas deberían realizarse con un esquema similar al diseñado
experimentalmente en este trabajo y con un mayor número de repeticiones.
Bibliografía
1) Paolicchi,F; Zumárraga,M; Gioffré;
Zamorano,P; Morsella,C; Verna,A; Cataldi,A; Alito,A; Romano,M. 2000.
Diagnóstico de Paratuberculosis en bovinos de rodeo lechero. XXI World
Buiatrics Congress. Uruguay.
2) Grant,I; Stabel,J. 1998. Does Mycobacterium
paratuberculosis survive current pasteurization conditions? Letter to the
editor. App Environ Microbiol, 64(7): 2760-2761.
3) Stabel,J. 2000. Jhone's disease and milk: do
consumers ed to worry? J Dairy Sci, 83(7): 1659-1663.
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