|
|
Inicio >
Información >
Por tema >
Ganadería >
Bovinos -
Mejoramiento genético > Prueba
> XIV
XIV Prueba de comportamiento
de toros a campo - 2006/2007
|
|
|
Si lo desea, puede bajar a su PC el informe
completo de la Prueba 2007, descargando el siguiente archivo:

Resultados 2007
[Documento PDF comprimido - 733 KB]
|
|
Balcarce, abril de 2007
Responsables:

- Ing. Agr. LILIA MAGDALENA MELUCCI
- Ing. Agr. CARLOS ALBERTO MEZZADRA
- Méd. Vet. OSVALDO GUILLERMO MELUCCI
- Ing. Agr. EDGARDO LEOPOLDO VILLARREAL
- Sr. RICARDO SOFIAK
- Sr. RAMON RODRIGUEZ
- Sr. MARCOS PEREYRA
- Sr. Luis BARBUTTI
|
|
|
|
|
|
Unidad Integrada Balcarce
Fac. Ciencias Agrarias (UNMDP) – EEA (INTA) Balcarce
Grupo de Genética Zootécnica
- Proyecto AGR 202/05 (UNMDP): Objetivos y Criterios de Selección en
Bovinos para Carne.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Introducción
Con el objetivo de contribuir al mejoramiento
genético de los rodeos de producción de carne bovina en condiciones
pastoriles mediante selección y establecer un proceso continuo de
interrelación entre el sector productivo, el de generación de
tecnología y el de formación de recursos humanos, se llevó a cabo la
XIV Prueba de Producción de Toros a Campo en la Unidad Experimental 7
de la EEA (INTA) Balcarce.
Participaron de la XIV Prueba, 24 toros A. Angus,
8 Criollos y 18 Hereford. Los reproductores Angus ingresaron a la
evaluación el 18 julio 2006, con 329,96 ± 25,45 días y 262,21 ± 45,78
kg de edad y pesos promedio, respectivamente. Los reproductores
Criollo promediaron al inicio de la evaluación, 321,88 ± 23,42 días de
edad y 218,00 ± 44,68 kg de peso. Los reproductores Hereford se
evaluaron bajo dos grupos de comparación, debido a la mayor dispersión
en la edad inicial. Los nacidos en invierno, grupo Hereford 1,
registraron una edad y peso promedio de 314,93 ± 34,49 días y 214,14 ±
54,42 kg., respectivamente. El grupo de animales nacidos durante el
otoño, Hereford 2, tuvieron un promedio inicial de 457,25 ± 25,51 días
de edad y 314,00 ± 68,28 kg de peso.
En el cuadro 1 se presentan las cabañas
participantes y el número de reproductores por raza.
Cuadro 1: Número de reproductores por raza y establecimiento
participante.
|
|
| |
|
Cabaña |
Responsable |
A |
C |
H |
|
Agropecuaria Ibis |
Sr. Carlos Downey |
|
3 |
|
|
El Carmen |
Ing. Agr. Eugenio Ridruejo |
2 |
|
|
|
El Nandú S.A. |
Dr. Andrés Cornejo |
3 |
|
|
|
Flores Chicas |
Ing. Alberto Areco |
2 |
|
|
|
La Carablanca |
Sr Benito Javier Salgado |
4 |
|
|
|
La Florida |
Sr Luis Ispizua |
2 |
|
|
|
La Guardia |
Ing. Juan Martín Lahitte |
|
|
4 |
|
Santa Rosa |
Ing. José Larrauri |
1 |
|
|
|
Los Alamos |
Roberto Freije y otros |
1 |
|
|
|
Los Pinos |
Med. Vet Néstor Scioli |
2 |
|
2 |
|
Palpalá |
Sr. Miguel Solanet |
|
1 |
|
|
Pichi Mati |
Dr. Juan Jose Fioramonti |
2 |
|
|
|
CRIA |
Dr. Andrés Cornejo |
|
|
2 |
|
INTA |
INTA |
3 |
4 |
8 |
|
San Edmundo |
Sr. Fernando Hernández |
2 |
|
2 |
|
Total |
24 |
8 |
18 |
|
|
| |
|
Manejo de los animales y análisis de la información:
Todos los animales fueron manejados como un solo
grupo en pastoreo continuo de pasturas cultivadas con especies
fundamentalmente otoño-invierno-primaverales y suplementados solo
exclusivamente con rollos de las mismas pasturas durante el invierno.
En la página 10 se describe el calendario
sanitario general de la prueba y cada productor puede recibir en forma
individual un detalle del control sanitario y tratamientos
individuales de sus reproductores en caso que hubieran sido
necesarios.
En las páginas 11 y 12 se presentan los datos de
paternidad de cada animal participante Angus, Criollo y Hereford,
respectivamente.
Las páginas 13 y 14 contienen para cada animal la
fecha de nacimiento, peso al nacer, edad al inicio de las mediciones (
18 julio 2006), la diferencia en días de edad de cada animal respecto
a la media del grupo racial y el último peso registrado (19 abril
2007), para Angus, Criollo y Hereford, respectivamente.
Se realizaron 3 determinaciones de circunferencia
escrotal (CE) y de alzada a la grupa (Alz) y dos mediciones de área
pélvica (AP) (cuadro 2).
A partir de estas mediciones, se estimó el
crecimiento diario individual en CE, ALZ y AP, lo que permitió luego
ajustar a 545 días de edad la CE (CE_545), Alz (Alz_545 y AP (AP545)
de los animales nacidos en invierno y a 700 días de edad los nacidos
en otoño: CE_700, Alz_700 y AP_700, respectivamente.
Así por ejemplo, en la situación particular de la
CE, se procedió de la siguiente forma:
CE _545= ((545 – Ed_p) x GAN_CE) + CEp
Donde :
CE_545 = Circunferencia escrotal ajustada a 545 días de edad.
Ed_p = edad promedio entre las dos últimas mediciones.
GAN_CE= tasa de crecimiento diario en la CE
CEp= CE promedio entre las dos últimas mediciones.
El AP y Alz, se ajustaron procediendo de igual
manera. Posteriormente y a partir de la Alz_545 o Alz_700, se estimó
el frame del animal a la edad correspondiente: frame_545 y frame_700
para grupo 1 y 2, respectivamente.
Cuadro 2: Fechas de medición de circunferencia escrotal (CE),
alzada (Alz) y área pélvica (AP).
|
|
|
|
|
|
18 julio 2006 |
7 noviembre 2006 |
10 abril 2007 |
|
CE |
CE |
CE |
|
Alz |
Alz |
Alz |
|
|
AP |
AP |
|
|
|
|
Los animales fueron pesados cada 28 días, previo
a un encierre de 8 hs., y se realizaron las determinaciones
ecográficas del espesor de grasa dorsal (EGD) y área de ojo de bife (AOB).
La grasa intramuscular (GIM) se determinó sólo en las dos últimas
fechas y e los animales que superaron los 5mm de EGD.
Las determinaciones ecográficas se realizaron por
ultrasonografía mediante un ecógrafo PIE MEDICAL 200 con un
transductor de 19cm configurado a 3.5 MHz. Las mediciones fueron
hechas en la región dorsal izquierda del animal y a la altura del
intervalo entre las costillas 12º y 13º.
El EGD, se expresa en mm y es el promedio de dos
determinaciones realizadas en el centro del bife y a ¾ de la punta del
mismo. Si bien esta característica es buena predictora del estado de
terminación, no lo es de la cantidad de grasa total del animal. Posee
una heredabilidad (h2) mediana de alrededor del 30%
El AOB es una de las características de la res
más importantes que se pueden determinar ecográficamente. Representa
el área total que posee el músculo Longissimus dorsi, comúnmente
conocido como bife ancho. Contrariamente a la grasa dorsal, es un buen
predictor de la cantidad de músculo que posee el animal. Su h2 es de
alrededor del 35 %, lo que implica que la selección basada en este
carácter puede reflejar un importante progreso genético en
relativamente corto plazo.
A partir de los registros de cada animal, se
estimaron las tasas de crecimiento diarias en EGD y AOB y las
ganancias diarias de peso (GDPD), por períodos y totales para cada
animal (cuadro 3).
Cuadro 3: Mediciones de EGD y AOB y GDPD comprendidas en cada
período.
|
|
|
|
|
Fechas |
|
18/7 |
8/8 |
5/9 |
4/10 |
7/9 |
5/12 |
5/1 |
7/2 |
5/3 |
19/4 |
|
invierno |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
primavera |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
verano |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
otoño |
|
|
|
|
Para los períodos indicados en el cuadro 3 se
estimaron también los promedios para peso, ganancias diarias de peso,
EGD y AOB.
Resultados:
En las páginas 15 y 16 se presentan las tres
mediciones de CE, tasa de crecimiento testicular (gan_ce, cm/día) y la
CE_545, Frame_545 y AP545, para Angus, Criollo y Hereford 1 y CE_700,
Frame_700 y AP700 para Hereford 2.
Las páginas 17 y 18 presentan las ganancias
diarias de peso por período y total, los pesos promedio por período y
el peso ajustado a 545 días de edad (P_545) para Angus, Criollo y
Hereford 1 y a 700 días de edad (P_700) para Hereford 2. Tanto el
P_545 como el P_700 se estimaron a partir del peso promedio (P_oto),
la ganancia diaria de peso total (gan_tot) y la diferencia de edad del
animal respecto de 545 o 700 días, según correspondiera.
Las páginas 19 y 20 contienen para cada raza, el
espesor de grasa dorsal (EGD) promedio por estación, la tasa de
crecimiento mensual durante la prueba y el EGD ajustado a 545 (EGD_545)
o 700 (EGD_700) días de edad, según el grupo. Este valor del EGD
ajustado por edad se calculó sobre la base del EGD promedio de otoño (egd_oto),
la tasa de crecimiento diaria durante el otoño y la diferencia de edad
del animal respecto de 545 o 700 días, según correspondiera.
Las páginas 21 y 22 contienen para cada raza, el
área del músculo longissimus dorsi (AOB) promedio por estación, la
tasa de crecimiento mensual durante la prueba y el AOB ajustada a 545
(aob_545) o 700 (aob_700) días de edad, según el grupo. Este valor del
AOB ajustado por edad se calculó sobre la base del AOB promedio de
otoño (aob_oto), la tasa de crecimiento diaria durante el otoño y la
diferencia de edad del animal respecto de 545 o 700 días, según
correspondiera.
El porcentaje de grasa intramuscular (% GIM) solo
se pudo determinar en los toros 9 y 31 (Hereford 2) en el mes de marzo
y en los toros 9, 31 y 162 en el mes de abril. El resto de los
animales no alcanzó el nivel adecuado de EGD para una correcta
determinación del % de GIM. El cuadro 4 muestra los valores
correspondientes al promedio de ambas mediciones para los toros 9 y 31
y el valor registrado en abril para el toro 162.
Cuadro 4: Porcentaje de grasa intramuscular.
|
|
|
|
|
Cabaña |
Raza y grupo |
toro |
GIM (%) |
|
La Guardia |
H 2 |
9 |
1.01 |
|
CRIA |
H 2 |
31 |
1.92 |
|
La Guardia |
H 2 |
162 |
1.81 |
|
|
|
|
Las páginas 23 y 24 contienen para cada animal,
los valores de las variables que expresarían el tamaño y desarrollo
muscular del reproductor: frame_545 o frame_700; P_545 o P_700; AOB_545
o AOB_700 y el índice de musculosidad (musc) que resulta del cociente
entre el AOB respecto de cada 100 kg de peso del animal (AOB_545 /
(P_545/100) o AOB_700 / (P_700/100), según corresponda).
Ubicación relativa de los toros de acuerdo a los índices: pastoril,
mejorado y de cría.
Hasta el momento se ha presentado el
comportamiento de los reproductores en forma individual para cada uno
de los caracteres de crecimiento evaluados. Sin embargo, puede suceder
que animales sobresalientes en algunos aspectos registren un
comportamiento menos destacado en otros o que algunos animales se
adecuen mejor que otros a determinados sistemas productivos. Es por
ello que se identificaron tres escenarios productivos:
1- pastoril
2- mejorado
3- con mayor énfasis en la cría.
En el escenario pastoril se trató de identificar
qué animales se comportarían mejor en un sistema de producción
exclusivamente pastoril, sin ningún tipo de suplemetación alimenticia.
El objetivo aquí es identificar animales que posean un buen desarrollo
muscular, fácil engrasamiento y buena fertilidad, criterios de
selección potencialmente importantes en los sistemas pastoriles (I_pastoril)
En el escenario mejorado, si bien la base
alimenticia es también pastoril, los animales no sufrirían
restricciones nutricionales en ningún momento del año, ya que cuando
ello suceda, el sistema será suplementado. El objetivo en esta
situación es identificar animales con buena conformación carnicera,
altas ganancias de peso, buena fertilidad y con menor importancia
relativa en la tasa de engrasamiento dado que el sistema de producción
les garantiza adecuada terminación (I_mejorado).
Finalmente, el tercer escenario corresponde a
aquellos sistemas que requieren mayor énfasis en los aspectos
relacionados a la cría, brindando mayor importancia relativa a la
fertilidad y facilidad de parto, altos niveles de grasa dorsal de
manera que garantice en las hembras la movilización de reservas en los
períodos de stress nutricional y con ponderación negativa sobre el
peso final para evitar el incremento de tamaño corporal en las hembras
y el mayor consumo de alimento asociado al mayor tamaño corporal (I_cría).
Para el cálculo de los índices se procedió de la
siguiente manera:
Los valores individuales de cada variable se
expresaron en forma estandarizada. Esto significa que se calculó la
diferencia entre cada valor y el respectivo promedio para la raza y
esta diferencia se dividió por el desvío estándar correspondiente.
Valor del carácter estandarizado = (valor del
carácter en el toro – promedio del grupo de comparación) / desvío
estándar del carácter en el grupo de comparación
El desvío estándar (DE) es una forma de
cuantificar la variación del carácter en la población. Si los animales
varían mucho entre ellos, el DE será mayor y viceversa. La aplicación
de este procedimiento permite comparar el mérito relativo de un animal
para dos o más variables que se expresan en distintas unidades y que
tienen distintos DE.
Cuando la información es expresada de esa manera,
se dice que los datos están estandarizados y los valores varían entre
-3 y +3 DE alrededor de la media. Se sabe que en el intervalo
comprendido entre -1 y +1 DE alrededor del promedio del carácter, se
encuentran el 66 % de los animales de ese grupo o población; dentro de
± 2 DE, se encuentra el 95 % de la población y dentro de ± 3 DE, se
encuentra el 99 % de los animales de la población (figura 1)
Figura 1: Distribución de frecuencias de la variable normal
estandarizada.
|
|
|
|

-3 -2 -1 0
+1 +2 +3
|
|
|
|
Un toro cuya variable estandarizada es de 2,
estará dentro del 2.5 % superior para ese carácter, mientras que un
toro cuya variable estandarizada es de -2 estará dentro del 2.5 %
inferior para ese mismo carácter.
Una vez que las variables medidas se
transformaron a sus valores estandarizados, estos últimos se
utilizaron para calcular los índices mencionados, de acuerdo a las
ponderaciones relativas (%) detalladas en el cuadro 5.
Cuadro 5: Criterios de selección comprendidos en cada índice y las
correspondientes ponderaciones relativas (%).
|
|
|
|
|
Criterio |
I_pastoril |
I_mejorado |
I_cria |
|
AOB_545 o AOB_700 |
20 |
40 |
|
|
EGD_545 o EGD_700 |
25 |
|
35 |
|
Tasa de crecimiento en EGD/día |
|
5 |
|
|
GDPD_total |
10 |
30 |
|
|
CE_545 o CE_700 |
20 |
25 |
40 |
|
Musc |
25 |
|
|
|
AP545 o AP700 |
|
|
30 |
|
P_545 o P_700 |
|
|
- 10 |
|
PN |
|
|
- 20 |
|
Tasa de crecimiento en AOB/día |
|
|
25 |
|
Total |
100 |
100 |
100 |
|
|
|
|
Donde:
AOB_545 o AOB_700 = corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para el área del ojo del bife ajustada
por edad.
EGD_545 o EGD_700 = corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para el espesor de grasa dorsal
ajustada por edad.
EGD/día = corresponde a la ubicación relativa del animal respecto
al promedio de la raza para la tasa de variación diaria en el espesor
de grasa dorsal.
GDPD_total = corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para la ganancia diaria de peso
promedio durante la prueba.
CE_545 o CE_700 = corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para la circunferencia escrotal
ajustada por edad.
Musc = corresponde a la ubicación relativa del animal respecto al
promedio de la raza para área de ojo de bife ajustada por edad y por
cada 100 kg de peso vivo ajustado también a edad fija, indicador de la
musculosidad del animal.
AP545 o AP700= corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para el área pélvica ajustada por
edad.
P_545 o P_700 = corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para el peso vivo ajustado a edad
fija.
Peso al nacer = corresponde a la ubicación relativa del animal
respecto al promedio de la raza para el peso al nacimiento.
AOB/día = corresponde a la ubicación relativa del animal respecto
al promedio de la raza para la tasa de variación diaria en el área del
ojo del bife.
Las páginas 25 y 26 contienen para cada raza y grupo, el orden de
mérito de los toros en función de: I_pastoril; I_mejorado ; I_cría.
Dentro de cada índice y para cada raza y grupo, los animales están
ordenados en orden de mérito decreciente.
Ing. Agr. Lilia Magdalena Melucci
Prof. titular Área de Genética y Mejoramiento Genético
Orientación Mejoramiento Animal.
Facultad de Ciencias Agrarias
Universidad Nacional de Mar del Plata
lmelucci@balcarce.inta.gov.ar
lmelucci@telefax.com.ar
|
|
|
|
Caracterización de los reproductores sobre la base
de análisis del ADN
Se continuó con la evaluación genómica de los
animales que participan de la Prueba de comportamiento de toros bajo
condiciones de pastoreo. Durante este ciclo se contó con la
colaboración del DR. GUILLERMO GIOBAMBATTISTA de la
Universidad Nacional de La Plata y su equipo de trabajo.
En la página 31 se
presentan los resultados de la evaluación para algunos genes o
marcadores genéticos que ejercen su efecto sobre: hormona de
crecimiento; tiroglobulina; leptina; IGF1 y BOLA-DRB3.
Genes estudiados en la población de toros pertenecientes a la XIV
Prueba de Comportamiento de Toros a Campo, ciclo 2006/2007
Dr. Guillermo Giobambattista UNLP.
I- HORMONA DE CRECIMIENTO(GH):
La hormona del crecimiento ó somatotropina es
codificada por el gen GH y secretada en el Sistema Nervioso Central
(neuronas del Hipotálamo). Su liberación regula el crecimiento
(incremento del tamaño muscular, óseo y de los órganos internos) y el
metabolismo de los animales.
Se han identificado diferentes alelos o variantes
(polimorfismos) del gen GH bovino, que han sido asociadas a
diferencias en el crecimiento. Se ha reportado que los marcadores
hallados en éste gen están asociados con el peso al nacimiento,
ganancia diaria predestete y ganancia diaria postdestete. El
polimorfismo utilizado en la presente prueba corresponde al sitio
variable presente en el exón 5 que presenta dos alelos: A y B.
Reis y col. (2001) reportaron efectos
significativos del genotipo del exón 5 de GH en razas portuguesas
bovinas. Los resultados sugieren que el genotipo AB se asocia
positivamente con pesos más elevados en estadios finales del
crecimiento.
II- TIROGLOBULINA (TG):
Las hormonas tiroideas (T3 y T4) tienen un
importante rol en la regulación metabólica y, entre otras funciones,
afectan el metabolismo graso. La tiroglobulina (TG) es el precursor de
T3 y T4 en la glándula Tiroides, por lo que se ha considerado como gen
candidato para explicar diferencias en el depósito de grasa.
El polimorfismo de TG muestra una asociación
genotípica entre los niveles de marmoreo (marbling) en el ganado
criado en feedlots. Se han identificado para este gen dos alelos (2 y
3). Los animales que presentan los genotipos 2/3 y 3/3 poseen un mayor
nivel de marbling que aquellos con genotipo 2/2.
|
|
|
|
III- LEPTINA:
La Leptina (Lep, leptin) es una hormona
proteica codificada por el gen la obesidad (ob, obese gene),
sintetizada principalmente en los adipocitos. Debido a su rol central
en la movilización de las grasas y en el metabolismo energético,
representa uno de los mejores marcadores fisiológicos para tamaño
corporal, consumo de alimento, gasto de energía, balance energético
corporal, reproducción y ciertas funciones del sistema inmune. Los
diferentes polimorfismos de Lep (región promotora, exón 2, exón 3) han
sido asociados con concentración de leptina en el suero, consumo de
alimento y grasa corporal.
En el tercer exón del gen Lep bovino se ha
identificado una mutación puntual que cambia una citosina (C) por una
timina (T), provocando un cambio en la secuencia de aminoácidos de una
alanina por valina (posición 59 de la proteína). Esta mutación permite
definir la presencia de dos variantes alélicas A y B. Numerosos
trabajos sobre el tema han relacionado al alelo B con mas apetito,
mayor tasa de crecimiento, mayor deposito de grasa y mayor peso de la
res.
IV- FACTOR 1 DEL CRECIMIENTO PARECIDO A LA INSULINA (IGF1):
El factor 1 de crecimiento parecido a la insulina
(también conocido como insulin-like growth factor-1 o IGF-1) es un
polipéptido que forma parte de un grupo de factores de crecimiento
parecidos a la insulina. Este factor es secretado principalmente por
el hígado en respuesta a señales de la hormona del crecimiento (GH).
Los principales tejidos diana afectados por el IGF-1, en combinación
con la hormona del crecimiento son los músculos, cartílagos, huesos,
hígado, riñones, nervios, piel y pulmones. El factor IGF-1 produce
numerosos efectos estimulantes del crecimiento, regulando además el
desarrollo muscular y de los adipositos.
En el promotor del gen que codifica para el
factor IGF-1 existe un microsatélite (CA)n, cuyas variantes (o alelos)
se han asociado a diferencias en el crecimiento, principalmente en el
peso al nacer, aunque también en el peso al destete y el peso de
faena. La variantes encontradas han sido llamadas según su peso
molecular: 231, 229, 227 y 225, esta última exclusiva de las razas
cebuinas.
Moody y col. en 1996 trabajando con ganado de
Raza Hereford encontró que la presencia del alelo 229, frente al 231,
podría explicar hasta un 16% de las diferencias encontradas en el EPD
de peso al nacer, aunque no detallan cual de las variantes es la
favorable. Otros autores han encontrado asociaciones similares en
otras razas y con pesos en edades diferentes del animal, aunque con
resultados no tan contundentes.
V- BOLA-DRB3 (Bovine Lymphocyte Antigen):
El Complejo Principal de Histocompatibilidad en
bovinos se denomina BoLA y ocupa un rol central en la respuesta
inmune. Este complejo es de gran importancia para la adaptación del
individuo al medio, por lo que influye directa o indirectamente sobre
los caracteres de producción.
Entre los genes más estudiados del BoLA se
encuentra el gen BoLA-DRB3 para el que se han descripto alrededor de
100 alelos. La caracterización de los alelos del BoLA-DRB3 se basa en
el análisis de la región de reconocimiento del antígeno. Se ha podido
comprobar la correlación entre la presencia de algunos de los alelos
con resistencia o susceptibilidad a enfermedades tales como leucosis,
mastitis y dermatofilosis. Así por ejemplo en el caso de la leucosis
bovina, el alelo DRB3.2*8 se ha correlacionado con susceptibilidad a
la enfermedad mientras que la variante DRB3.2*11 se ha asociado con
resistencia (Zanotti y col.1996).
Por otra parte, Dietz y col. (1997), y Kelm y
col. (1997) estudiaron la relación entre medidas genéticas de mastitis
(score de células somáticas, SCS) y los alelos del BoLA-DRB3.2.
Estos autores encontraron asociación entre el alelo DRB3.2*16 y SCS
elevado, y el alelo DRB3.2*24 con SCS bajo.
En el caso de la dermatofilosis, enfermedad que
produce importantes pérdidas en la producción y presenta una tasa de
mortalidad del 15%, Maillard y col. (2002) detectaron que el alelo
DRB3.2*9 se encontraba significativamente asociado con alta
susceptibilidad a la enfermedad.
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|